子宫内膜异位症(简称内异症)是一种良性的妇科疾病,由具有生物活性的子宫内膜组织植入宫腔外的部位引起。育龄期女性内异症的发病率高达 10%～15%。虽然内异症一直是医学研究的重点和热点,但其发病机制尚无定论。对于内异症的发病机制最令人信服的是“经血逆流种植学说”,由Sampson提出,其观点认为内异症是月经期含有子宫内膜组织的经血通过输卵管逆流到子宫腔以外的位置,并在卵巢和盆腔腹膜等处黏附、种植、血管形成、生长蔓延[1-2]。为了提高无创诊断的准确性,简便有效地诊断内异症并鉴别内异症与其他妇科疾病,发掘一类新的无创诊断方法已经成为妇科实验研究的重点。本研究对内异症患者血清中某些炎症细胞因子及LXA4的表达进行检测和对比,探讨其在内异症诊断及病情程度分析中的作用,为临床治疗提供新的思路。
对象与方法
1.研究对象:选取2022年4月—2023年3月于河南省人民医院妇科行腹腔镜手术,经腹腔镜(保留卵巢)手术及病理结果分析确诊的内异症患者 30 例为内异症组。患者年龄在18～53岁之间,根据修订后的美国生育学会标准(rAFS)分级显示出适当的组织学分期和评分(总评分、种植体评分和粘连评分),并分为轻症组(包括 I 期及 II 期)和重症组(包括 III 期及 IV 期),其中轻症组 15 例,重症组 15 例。对照组是因妇科良性疾病行腹腔镜手术,且病理结果显示无内异症的患者31例,包括(1)没有症状的月经周期规律的女性,没有已知的疾病,因乳腺癌或卵巢癌等家族风险,正在接受双侧输卵管结扎和/或预防性双侧输卵管卵巢切除术,患者17例;(2)子宫平滑肌瘤患者14例。内异症组及对照组患者均月经规律,无其他内分泌、免疫和代谢性疾病,术前3个月内未使用激素治疗。两组患者年龄比较,差异无统计学意义(P>0.05)。
2.方法:(1)样本采集。患者手术前1 d禁食 12 h后清晨采集肘静脉血10 mL,样本存储在无菌干燥真空枸橼酸抗凝管中,在室温下放置2 h,于河南省人民医院实验室更换离心管,再放入离心机以2 600 r/min,4 ℃ 离心10 min,用加样器提取上层清液分装放入标记的冻存管中,然后放在-80 ℃冰箱中保存待测。待全部研究对象血清收集工作完成后,于实验前一晚从-80 ℃冰箱中取出血清,再放入-20 ℃冰箱中过夜,次日再将血清拿出,于常温下放置1 h,待血清转化为液体后,采用ELISA双抗体夹心法对标本进行逐一检测。
(2)样本检测。分别选用EA-103试剂盒(Signosis品牌)、xy-E10127试剂盒(IBL-America品牌)及xyB452Ge试剂盒(MitoSciences品牌),通过 ELISA方法(仪器使用河南省人民医院实验室中酶联免疫吸附仪)分别测定血清炎症细胞因子IL-2、IL-4、IL-6、IL-10、IL-17A、IL-37及LXA4水平。
(3)统计分析。本实验数据采用SPSS 17.0软件进行统计学分析。计量资料以均数±标准差
表示,组间比较采用卡方检验。P<0.05差异有统计学意义。
结果
1.患者基本情况:内异症患者30例(其中轻症组 15 例,重症组 15 例),对照组 31 例。所纳入的患者中 EMS I 期 7 例,II 期 8 例,III 期 7 例,IV 期 8 例。内异症的轻、重症与对照组相比,年龄、妊娠生育史等基本情况差异无统计学意义(P>0.05)。见表1。
表1 研究对象基本情况
注:a 表示与对照组相比,P<0.05
变量对照组轻症内异症组重症内异症组年龄(岁)36.0±6.237.4±5.437.2±4.4生育史(次)1.8±0.81.80±0.61.9±0.7痛经评分02.20±1.02.9±1.0a
2.血清各项指标浓度水平。血清中各 ASRM 分期内异症组的炎症细胞因子 IL-2、IL-17A 及 LXA4浓度水平较对照组降低,并随疾病的严重程度增加而降低,差异有统计学意义(P<0.05);炎症细胞因子 IL-4、IL-6 浓度与对照组相比,结果无统计学差异(P>0.05);炎症细胞因子 IL-10、IL-37水平与对照组相比明显升高,其浓度值随疾病分期的增加而升高,结果有统计学意义(P <0.05)。见表2。
表2 血清各项指标浓度水平
注:a 表示与对照组相比,P<0.05;b 表示与轻症组相比,P<0.05
血清指标对照组轻症组重症组IL-2 2.3±0.3b 1.4±0.6a 1.1±0.6abIL-4 2.2±1.0 2.4±0.9 2.5±0.4IL-615.6±6.217.1±6.618.3±4.3IL-10 1.7±1.1b28.93±23.72a41.6±29.6abIL-17A236.1±101.1b63.6±34.2a27.8±10.4abIL-3748.0±20.1b134.4±29.9a166.5±48.7abLXA4462.6±148.6b339.6±111.1a258.7±109.5ab
3.血清指标与病情程度的相关性分析。血清中IL-2、IL-17A、LXA4与内异症是否发病呈负相关,差异具有统计学意义(P <0.05); IL-10、IL-37与内异症是否发病呈明显正相关,差异具有统计学意义(P<0.05)。IL-4 和 IL-6与内异症是否发病不存在明显的相关性(P>0.05)。见表3。
表3 血清指标与是否患病和病情严重程度的Pearson 相关性分析
注:*P<0.05
血清指标患病(对照组和实验组) 病情严重程度(轻症组和重症组)IL-2-0.66∗-0.30∗IL-40.110.04IL-60.150.11IL-100.52∗0.21IL-17A-0.82∗-0.62∗IL-370.75∗0.33∗LXA4-0.49∗-0.33∗
血清中IL-2、IL-17A、LXA4与内异症的病情程度呈负相关,差异具有统计学意义(P<0.05);IL-37与内异症的病情程度呈正相关,差异具有统计学意义(P <0.05)。其余指标与内异症病情程度不存在明显的相关性(P >0.05)。见表3。
4.血清中各项指标的敏感性和特异性分析。对 IL-2、IL-17A 及IL-37 进行ROC曲线分析得出,血清中IL-2对内异症的敏感性为 90%,特异性为93.3%,截止浓度为2.005 pg/mL;血清中IL-17A对内异症的敏感性为90%,特异性为96.7%,截止浓度为108.22 pg/mL;血清中IL-37对内异症的敏感性为95%,特异性为96.7%,截止浓度为86.985 pg/mL(P<0.05)。见图1。
图1 血清指标与是否患病和病情严重程度的ROC曲线
对IL-17A、IL-37进行ROC曲线分析得出,血清中IL-17A对内异症病情程度的敏感性为86.7%,特异性为86.7%,截止浓度为31.99 pg/mL;血清中IL-37对内异症病情程度的敏感性为60%,特异性为86.7%,截止浓度为134.525 pg/mL(P<0.05)。见图1。
讨论
子宫内膜异位症是一个严重的公共健康问题,内异症的诊断依赖于腹腔镜手术探查及组织病理学证实,而手术操作的潜在并发症及高昂费用,使得患者依从性较差,往往容易延误病情。因此,识别内异症的潜在无创生物标志物具有重要的意义[3-5]。有研究表明,子宫内膜在侵及肌层之前,通过表达 IL-10和IL-10R1,可以使子宫内膜产生逃避宿主免疫监视的能力,可能与异位子宫内膜的免疫耐受有关[4,6]。本研究发现实验组血清IL-37、IL-10水平明显高于对照组,血清IL-17A、IL-2水平明显低于对照组。IL-37与内异症的发病及病情程度显著相关,提示IL-37可能在内异症患者的免疫反应中发挥重要作用。
脂氧素A4是一类新的花生四烯酸代谢物,LXA4 最初是通过人类白细胞中15-过氧基-5,8,11,13-二十碳四烯酸(15-HPETE)形成的。血小板和白细胞相互作用通过白细胞 5-脂氧合酶环氧化物产物LXA4的跨细胞转化形成。LXA4在嗜酸性粒细胞、肺泡巨噬细胞、单核细胞和上皮细胞中含量丰富。研究表明,LXA4受体mRNA在雌性大鼠子宫内膜和子宫肌层的表达明显高于卵巢;内异症患者及内异症大鼠模型显示异位子宫内膜中 LXA4受体的表达明显低于正常组织,表明LXA4及其受体可能在生理月经周期和内异症等病理生理条件下发挥作用[7,8]。此外,贾旋等人研究结果显示,LXA4可能参与EMS的病理、生理过程,且与患者痛经、R-AFS分期之间密切相关,与本研究结果相似,说明LXA4可以作为EMS疾病的诊断和病情评估参考指标之一[10]。
本研究结果可能有助于为内异症提供额外的血清生物标志物。通过血清中炎性细胞因子IL-37、IL-10、IL-17A、IL-2、LXA4等浓度的表达差异,为子宫内膜异位症无创性诊断及病情严重程度的界定提供了更多依据;血清中炎性细胞因子IL-37、IL-17A、IL-2等水平的变化,提示子宫内膜异位症患病的风险变化。
本研究的主要局限性是样本数量较少。未来的研究应扩大样本量。综上所述,本研究的数据提示血清中一些炎性细胞因子、LXA4等的水平可能提示内异症患病的风险增加;IL-37、IL-2、IL-10、IL-17A、LXA4可以作为内异症的潜在血清标志物。此外,一些炎性细胞因子、LXA4是否影响在位和异位子宫内膜的确切机制还有待研究。
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