肺炎支原体肺炎(mycoplasma pneumoniae pneumonia，MPP)是儿童最常见的感染性疾病之一，近年来发病率逐年增加，重症病例的比例也呈增高趋势。免疫功能紊乱在MPP的发病中有重要作用，血清25羟维生素D[25-(OH)D]除了参与骨代谢外，对免疫和炎症反应也有重要影响，免疫调节作用日益受到关注。本研究探讨MPP严重程度与25-(OH)D水平的相关性及免疫功能变化在不同严重程度MPP发病机制中的作用。
对象与方法
一、对象
选取2010年7月—2012年1月在航空总医院儿科住院的MPP患儿88例，男47例，女41例，年龄1～5岁，平均年龄(3.7±0.9)岁。参照《诸福棠实用儿科学》及2007年中华医学会儿童社区获得性肺炎管理指南的诊断标准[1-2]，分为重度MPP组21例，轻度MPP组67例。患儿血清MP-IgM均为阳性或弱阳性，除外细菌、病毒、衣原体感染。重度MPP组男12例，女9例，年龄(3.6±1.0)岁；轻度MPP组男35例，女32例，年龄(3.7±0.8)岁。选取儿童保健门诊健康体检同龄儿童30例为对照组，男17例，女13例，年龄(3.6±0.9)岁。3组年龄、性别比例差异无统计学意义。
二、方法
1.诊断标准：重症MPP为体温≥38.5 ℃，呼吸频率≥70次/分(除外发热、哭闹等因素影响)，三凹征阳性，鼻扇、发绀、间歇性呼吸暂停、呼吸呻吟、拒食；轻症MPP为体温≤38.5 ℃，呼吸增快但<70次/分，无呼吸困难，正常进食[2]。
2.血清25-(OH)D的测定：应用罗氏COBAS E411电化学发光分析仪(竞争法)检测血清25-(OH)D。用含分离胶的试管采集静脉血3 ml，1 h内200 g离心3 min，提取血清，-18 ℃冻存。按仪器标准操作要求进行项目校准和样本测定，测定前将样本室温复温1 h，混匀后自动检测，记录检测结果。
3.外周血T细胞亚群CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+的测定：采取清晨外周静脉血2 ml，抗凝，美国BECKMAN COULTER公司的流式细胞仪，捕获细胞并分析结果，分别得出CD3+、CD4+、CD8+细胞在外周血中的百分数及CD4+/CD8+细胞比值。
4.统计学处理：采用SPSS 11.0统计软件进行处理，计量资料用
描述，三组间比较采用方差分析，两两比较采用LSD法；血清25-(OH)D与CD3+T细胞，CD4+T细胞，CD8+T细胞CD4+/CD8+相关性采用Spearman等级相关性分析。P<0.05为差异有统计学意义。
结 果
一、3组血清25-(OH)D及T细胞亚群结果比较
重度MPP组血清25-(OH)D水平比轻度MPP组、对照组低，轻度MPP组比对照组低；重度MPP组CD3+T细胞、CD4+T细胞、CD8+T细胞、CD4+/CD8+比值比轻度MPP组、对照组低；差异均有统计学意义。轻度MPP组与对照组CD3+T细胞、CD4+T细胞、CD8+T细胞、CD4+/CD8+比值比较，差异无统计学意义，见表1。
表13组血清25-(OH)D及T细胞亚群结果比较
注：与轻度MPP组比较，*P<0.05；与对照组比较，▲P<0.05
二、血清25-(OH)D及T细胞亚群的相关性
血清25-(OH)D与CD3+T细胞，CD4+T细胞，CD8+T细胞CD4+/CD8+比值呈正相关(r=0.904、0.873、0.591、0.501)。
讨 论
血清25-(OH)D是反映机体维生素D代谢的重要指标，也是反映维生素D营养状况的最佳指标[3]。维生素D不足被认为与许多免疫性疾病，如多发性硬化、I型糖尿病及哮喘、重症肺炎等有关[4-5]。作为一种神经内分泌-免疫调节激素，通过调节钙磷平衡及作用于淋巴细胞、中性粒细胞、巨噬细胞及呼吸道上皮细胞，刺激抗微生物多肽的表达，影响机体的炎症反应和抗菌活性，尤其在肺部感染中起着重要作用[6]。25-(OH)D通过刺激核内维生素D受体(VDR)产生免疫作用，VDR刺激表达抵抗细菌及病毒感染的抗菌肽[7]。维生素D缺乏可致患儿体内VDR减少，呼吸道上皮细胞细菌清除功能受损，炎症因子积聚，炎症反应难以控制。本研究显示，重度MPP患儿血清25-(OH)D水平明显降低，处于维生素D缺乏状态，轻度MPP组低于对照组，存在维生素D不足，证实维生素D水平越低，疾病越严重，与国内学者[8]的研究基本一致。推测维生素D水平影响MPP的发生、严重程度及预后。在秋冬季病原体流行的北方，儿童应补充适量维生素D，加强户外活动，增加机体免疫力。
MPP是儿科常见的呼吸道感染性疾病，约占小儿社区获得性肺炎的10%～20%，其发病率逐年上升，发病年龄逐渐提前，病情迁延不愈或反复发作，严重影响儿童健康。MPP发病机制与MP直接侵入呼吸道上皮及MP感染后免疫损伤有关[9]。目前更倾向于免疫机制，细胞介导免疫反应，大量细胞因子释放，导致病理免疫反应。MP对T淋巴细胞有丝裂原的作用，通过细胞因子及直接作用于巨噬细胞，介导广泛免疫反应，通过激活抗自身T淋巴细胞引起细胞增殖和破坏正常T淋巴细胞亚群的比例，机体免疫功能降低。机体正常免疫应答有赖于各种免疫细胞之间的互相协作或互相制约，以形成适度的免疫应答，使之既能清除异物抗原，又不致损伤机体自身组织。CD3+细胞是成熟T淋巴细胞的特异性标志，反映了T淋巴细胞活化的比例[10]。CD4+细胞主要是辅助T淋巴细胞，CD4+/CD8+比值是监测人体细胞免疫功能，反映机体免疫状态的主要指标[11]。肺炎支原体感染后可引起机体细胞免疫和体液免疫功能紊乱，表现为CD3+、CD4+、CD16+、CD56+、CD4+/CD8+比值下降，CD8+、CD19+上升；IL-4、IL-6、IL-8、IL-12、IL-15、IL-18等多种细胞因子参与MP感染的免疫病理反应过程。本研究显示，重度MPP组外周血CD3+、CD4+及 CD4+/CD8+比值下降，与万瑜等[12]研究基本一致。提示重度MPP患儿T淋巴细胞活化功能被抑制，免疫应答受到抑制，免疫功能失调，机体免疫功能下降，继而造成机体组织的损伤。病情越重，T细胞亚群比例失调越严重，自身组织损伤越广泛。
本研究显示血清25-(OH)D水平及T细胞亚群的变化具有相关性，考虑维生素D缺乏患儿免疫功能低下，中性粒细胞、单核细胞、淋巴细胞功能紊乱，易患支原体感染，感染后加重免疫损伤，T细胞亚群的有效免疫应答下降，不能清除异物抗原，造成机体损伤。因此婴幼儿应注意补充维生素D，不仅仅是骨骼健康，更能增强机体免疫力。
参考文献
1 胡亚美,江载芳.诸福棠实用儿科学.第7版.北京:人民卫生出版社,2002:1175.
2 中华医学会儿科分会呼吸分组《中华儿科杂志》编辑委员会.儿童社区获得性肺炎管理指南(试行)(上).中华儿科杂志,2007,45:83-90.
3 Holick MF.Vitamin D deficiency.N Engl J Med,2006,357:266-281.
4 Holick MF.High prevalence of vitamin D inadequacy and implications for health.Mayo Clin Proc,2006,81:353-373.
5 McNally JD,Leis K,Matheson LA,et al.Vitamin D deficiency in young children with severe acute lower respiratory infection.Pediatr Pulmonol,2009,44:981-988.
6 Yim S,Dhawan P,Ragunath C,et al.Induction of cathelicidin in normol and CF bronchial epithelial cells by 1,25-dihydroxyvitamin D3.J Cyst Fibros,2007,6:404-410.
7 Liu PT,Stenger S,Tang DH，et al.Cutting edge:vitaminD-mediated human antimicrobial activity against Mycobacterium tuberculosis is dependent on the induction of cathelicidin.J Immunol,2007,179:2060-2063.
8 万凤国,张雪兰,季正华,等.肺炎链球菌/呼吸道合胞病毒肺炎患儿维生素D与淋巴细胞亚群分析.临床荟萃,2013,28:979-981.
9 Shimizu T,Kida Y,Kuwano K.Triacylated lipoproteins derived from Mycoplasma pneumomiae activate nuclear factor kappa B through toll-like receptor 1 and 2.Immunology,2007,121:473-483.
10 姚春艳,金齐力,姜丽娜,等.正常人外周血自然杀伤T细胞(DC3+DC16+CD56+)比例.蚌埠医学院学报,2008,33:379.
11 刘风,徐玥璟.支原体肺炎患儿T淋巴细胞亚群和NK细胞水平的变化及其意义.实用临床医学,2006,7:3-5.
12 万瑜,程宝金,薛梅.小儿支原体肺炎T细胞亚群和免疫球蛋白水平的变化与分析.实用临床医药杂志,2010,14:28-30.