新生儿窒息是新生儿科常见的病症之一，严重的窒息往往会导致新生儿多器官功能损伤，从而致残、致死，已成为导致围生儿死亡的首要因素[1]。窒息的诊断目前仍以Apgar评分为标准，易受主观性等多种因素的影响，尚需一些客观指标进一步完善。组织型纤溶酶原激活物(t-PA)是纤维蛋白溶解系统的重要组成部分，能够参与细胞外基质降解，t-PA及相关抑制剂(如纤溶酶原激活物抑制剂-1，PAI-1)在维持凝血和抗凝系统平衡中发挥重要作用。因此，二者很可能参与了由于窒息缺氧导致的血管内皮细胞的损伤过程[2]。本研究选取2012年1月—2013年6月于本院就诊并治疗的足月窒息新生儿64例及同期足月健康新生儿20例，对比分析窒息新生儿与正常新生儿的血清t-PA、PAI-1含量，探讨血清纤溶酶原激活物对于新生儿窒息病情评估的临床意义。
对象与方法
一、对象
选取2012年1月—2013年6月于本院新生儿科就诊并住院治疗的足月窒息新生儿64例。选取同期足月健康新生儿20例为对照组。
二、方法
1.纳入标准：(1)胎龄37～42周，均于出生后12 h内入院治疗；(2)新生儿窒息的诊断参照邵肖梅等编制的《实用新生儿学》(第4版)中对于新生儿窒息的诊断标准[5]；(3)患儿未患有感染性疾病，凝血酶原时间(PT)，红细胞、白细胞、血红蛋白、血小板值及D-二聚体水平均在正常范围，且无血液系统家族遗传病；(4)本次研究符合医院伦理委员会要求，所有患儿家长签署知情同意书。
2.分组：以新生儿窒息分度标准，按照1 min Apgar评分将窒息新生儿分为轻度窒息(4～7分)、重度窒息(0～3分)。轻度窒息组34例，男18例，女16例；平均胎龄为(39.2±1.7)周；新生儿体重3 076～3 520 g，平均(3 342.4±157.7)g；出生后窒息时间 3～28 min，平均(12.1±2.0)min；血样采集时间(自出生后开始计时)(6.7±0.4)h。重度窒息组30例，男16例，女14例；平均胎龄为(39.6±1.8)周；新生儿体重3 127～3 589 g，平均(3 362.6±142.3)g；出生后窒息时间2～26min，平均(13.7±2.2)min；血样采集时间(6.5±0.5)h。对照组男12例，女8例，平均胎龄为(40.1±2.0)周；新生儿体重3 216～3 560 g，平均(3 356.0±123.0)g；血样采集时间(7.0±0.5)h。3组性别、胎龄、新生儿出生体重、血样采集时间比较，差异无统计学意义，具有可比性。
3.检测方法：血样收集均于新生儿出生后12 h内进行，采血部位选取股静脉，采血量为2 ml，置于干净的离心管内，3 000 r/min离心10 min，收集上清待检或于-20 ℃低温保存。对于t-PA、PAI-1的检测，采用酶联免疫吸附(ELISA)法进行，相关检测试剂盒就购自上海西唐生物科技有限公司，具体实验操作严格按照试剂盒说明书，并采用SAFEDA MB-601型全自动酶标仪进行测定。
4.统计学处理：采用SPSS 17.0统计学软件进行，经K-S法检验后，所有数据均呈正态分布。计量资料以(均值±标准差)表示，用单因素方差分析(one-way ANOVA)，LSD或SNK法进行两两比较检验；对t-PA、PAI-1含量及Apgar评分间进行Pearson相关性分析，P<0.05为差异有统计学意义。
结 果
一、3组血清t-PA和PAI-1含量的比较
3组血清t-PA和PAI-1含量比较，差异有统计学意义。轻度窒息组血清t-PA和PAI-1含量高于对照组，重度窒息组患儿血清t-PA和PAI-1含量高于轻度窒息组和对照组，差异均有统计学意义，见表1。
表13组血清t-PA和PAI-1含量的比较
注：与对照组比较，*P<0.05；与轻度窒息组比较，#P<0.05
二、t-PA、PAI-1含量与Apgar评分的相关性分析
血清t-PA、PAI-1含量与患儿Apgar评分负相关(r1=-0.587，P1=0.009；r2=-0.407,P2=0.013)，随着窒息程度的增加，血清t-PA、PAI-1含量也大幅提升，见图1。
图1 t-PA、PAI-1含量与Apgar评分的相关性
讨 论
新生儿窒息发生时，全身血流重新分布，以保证重要脏器供血，随着窒息的进一步加深，血管的调节功能丧失，新生儿脑、肾、肝、脾、胃肠等器官系统供血减少，最终会导致新生儿出现多器官功能损伤，甚至死亡[3-4]。研究显示[5-6]，血液动力学的改变是导致新生儿多器官功能损害的主要原因，这主要是由于新生儿窒息的发生，导致血管内皮细胞因缺氧而受损，从而刺激氧自由基和炎症相关细胞因子的分泌和释放，抑制前列腺素的合成，因此打破了凝血和抗凝系统间的平衡，出现血液系统功能紊乱，进而诱发多器官功能损害。刘俊燕等[7]研究发现，对于窒息新生儿多器官功能损害，重度窒息是导致其发生的最主要因素，经多因素logistic回归分析，OR为5.889。因此，新生儿窒息的检查和病情评估对于降低围产儿死亡率，提高患儿的生存状况具有重要意义。
现阶段研究发现[8]，组织型纤溶酶原激活物(t-PA)及其相关抑制剂纤溶酶原激活物抑制剂-1(PAI-1)参与了血管内皮细胞的损伤过程。t-PA是一个由527个氨基酸组成的单链糖蛋白，分子量为66～72 kD，具有丝氨酸蛋白酶活性，作为纤溶系统关键组分，可将纤溶酶原转化为有催化活性的纤溶酶，从而激活其纤维蛋白溶解的作用，在细胞迁移、血管再生、组织破坏与重塑等生物学过程中发挥作用[9]。PAI-1是丝氨酸蛋白酶抑制剂的主要活性型，包含402个氨基酸，其作为组织型/尿激酶型纤溶酶原激活物的抑制剂，主要用于抑制蛋白酶活性，减少其对于细胞表面及微血管基膜的溶解，从而保持组织及器官的结构完整性，维持其完整的生物学功能[10]。正常情况，t-PA和PAI-1在体内处于动态平衡。然而，当出现缺氧缺血等情况时，t-PA的含量迅速升高。国外的研究显示，缺氧时血脑屏障的通透性增加，这主要是由于t-PA水平升高，激活纤溶酶，使得血管基膜被破坏，从而进一步导致Ⅳ型胶原、层粘连蛋白和纤连蛋白等细胞外基质成分的水解[11]。另外，动物实验的研究结果发现，缺氧的新生鼠中星型胶质细胞和巨噬细胞内t-PA含量显著升高，表明其很可能参与了细胞毒性作用[12]。本研究结果显示，3组间血清t-PA和PAI-1含量差异有统计学意义；轻度窒息组血清t-PA含量高于对照组，重度窒息组血清t-PA含量高于轻度窒息组和对照组；t-PA、PAI-1含量与Apgar评分呈负相关，随着窒息严重程度的增加，其含量显著升高，表明窒息新生儿的纤溶活性改变，凝血与抗凝系统的平衡被打破。由于t-PA水平的升高，从而刺激PAI-1的表达量增加，与其他研究结果相一致[4]。
参考文献
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12 郭世杰,刘英,韩军,等.新生大鼠缺氧缺血性脑损伤t-PA、PAI-1表达的动态变化.中国免疫学杂志,2012,28:155-160.