新生儿溶血病(hemolytic disease of the newbon, HDN)是由于母婴血型不合引起的胎儿或新生儿同族免疫性溶血病[1]。临床上以ABO系统HDN最常见，其次为Rh系统HDN,其他血型系统极少见[2]。母婴ABO血型不合时，O型血孕妇所产生的IgG抗A或抗B抗体，可通过胎盘进入胎儿循环而引起胎儿或新生儿红细胞破坏，造成胎儿流产、早产、死胎、死产或HDN。本研究通过对与配偶ABO血型不合的O型血孕妇血型IgG抗体检测及其所生新生儿血型鉴定，对非O型血新生儿进行HDN检测，探讨孕妇不同抗体效价与新生儿ABO-HDN发生率的关系，为母婴ABO血型不合的围产期监护及干预提供依据，现报告如下。
对象与方法
1.对象：2012年1月—2014年1月在本院产科门诊产检的1 080例与配偶ABO血型不合的O型血孕妇，无输血史，Rh血型阳性。分娩非O型血新生儿689例，根据母婴ABO血型不合分为O-A组368例，O-B组321例。
2.仪器和试剂：FYQ型免疫微柱孵育器和TD-3A型离心机由长春博研科学仪器有限公司提供。微柱凝胶抗人球蛋白检测卡、ABO反定型试剂盒(人血红细胞)、2-巯基乙醇等均为上海市血液生物医药有限公司提供。
3.孕妇抗体检测：孕妇于孕16～20周行IgG抗A(B)效价检测，抗体效价≥64的孕妇每4周测定一次，抗体效价≥256给予口服茵陈颗粒。动态观察抗体变化情况。在试管中分别加入200 μl孕妇血清和等量2-巯基乙醇，混匀后37 ℃孵育30 min，充分破坏血清中IgM抗体；再取6只干净试管做好标记，在第1管中加入处理好的血清50 μl和生理盐水350 μl混匀，第2～6管依次取前一管血清200 μl加等量生理盐水做倍比稀释；采用微柱凝胶技术检测IgG抗A(B)效价。
4.新生儿检测：孕妇分娩后即刻取脐血检测新生儿ABO血型。早期(生后24～48 h)检测血清总胆红素及间接胆红素。疑似病例做HDN试验。新生儿溶血3项试验包括改良直接抗人球蛋白试验、游离抗体试验和抗体释放试验均采用微柱凝胶技术，具体方法参见《全国临床检验操作规程》[3]。
5.ABO-HDN诊断标准[4]：母婴ABO血型不合；孕母血型IgG抗体阳性；新生儿早期总胆红素、间接胆红素升高且进行性加重；改良直接抗人球蛋白试验和抗体释放试验有一项阳性者。同时符合以上4条方可诊断。
6.统计学处理：应用SPSS 17.0统计软件，计数资料采用卡方检验，P<0.05为差异有统计学意义。
结果
1.不同母婴血型ABO-HDN发生率的比较：ABO-HDN发生率24.1%(166/689)。O-A组ABO-HDN发生率28.5%(105/368)；O-B组ABO-HDN发生率19.0%(61/321)。两组发生率比较，差异有统计学意义。
2.孕妇IgG抗A(B)效价与ABO-HDN的关系：两组不同抗体效价间ABO-HDN发生率比较，差异均有统计学意义，见表1。随着孕妇血清IgG抗A(B)抗体效价(≤32、64、128、256、≥512)的依次递增，ABO-HDN的发生率逐渐增加，当抗体效价≥256时，ABO-HDN发病率明显增加。
表1 两组IgG抗A(B)效价与新生儿ABO-HDN发生率的关系[例(%)]
讨论
ABO-HDN常发生在母亲血型为O型，新生儿为A或B型的婴儿。母婴ABO血型不合时，在经胎盘母婴血交换过程中，胎儿红细胞进人母体循环，使母体产生相应的抗体，IgG类抗体通过胎盘作用于胎儿红细胞，可导致不同程度的溶血即ABO-HDN的发生。同时还可能干预器官发育而致胚胎发育停止而引起流产或畸形，对新生儿最大的危害是造成其死亡或留有不可逆的神经系统后遗症。所以需要对ABO-HDN早检测、早发现、早治疗，以达到优生优育的目的。
本研究显示，随着孕妇血清IgG抗A(B)抗体水平(≤32、64、128、256、≥512)的依次递增，ABO-HDN的发生率逐渐增加，与国内曾红艳等[5]报道的结果基本一致。且当孕母抗体达256以上时，ABO-HDN的发病率超过60%，提示孕母血型抗体效价水平与HDN发病率关系密切。这可能由于只有当孕母在一定量的胎儿红细胞抗原刺激下，产生较多的IgG抗体进入胎儿血循环并结合红细胞，诱发抗原抗体反应导致红细胞溶解破坏，才可发生ABO-HDN。因此，孕母IgG抗体效价越高，越有可能通过胎盘而增加HDN的发生。国内大多数文献认为孕妇血型抗体效价≥64，可发生ABO-HDN。本文研究发现抗体效价≤32时也有ABO-HDN发病，而孕母IgG抗体≥512时，反而无ABO-HDN发生，与国内马晓露等[6]相符。推测可能与血型抗体IgG亚群、吞噬细胞的黏附能力、胎儿红细胞的A或B抗原强弱以及孕妇胎盘致密性有关[7]。因此，对与配偶血型不同的O型血孕妇应常规检测IgG抗A(B)抗体效价，阳性或效价较高的孕妇也不必过于担心，动态监测抗体效价、配合医生积极产前干预，高效价不是必定发生ABO-HDN。抗体效价低的生后也要检测新生儿血型，监测新生儿血清总胆红素及间接胆红素水平，必要时做ABO-HDN检测以确诊。但目前检测孕妇产前血型IgG抗体效价仍然是预测血型不合HDN发生的一个重要参考指标[8]。本研究还发现，A型血新生儿比B型血新生儿发生ABO-HDN的概率增高，可能与胎儿A抗原位点较B抗原结合位点数量多有关[9]。研究显示，每个A型红细胞上约有81万～117万个A抗原结合位点，而每个B型红细胞上约有61～83万个B抗原结合位点[10]。
ABO-HDN的发生率随孕妇血清中IgG抗A(B)效价的增高而增加，产前检测与配偶血型不合的孕妇血清中IgG抗体并动态监测其效价可估计ABO-HDN发生的可能性，对效价较高的孕妇采取适当的治疗措施，从而减少ABO-HDN的发生率。此外，通过孕母IgG抗体效价检测，选择性地在新生儿出生时积极进行血型和HDN及血清胆红素检测，以早发现、早期治疗干预，减少甚至避免严重溶血病的发生，降低胆红素脑病的风险，对优生优育有重要的指导意义。
参考文献
1 肖倩，辛荣传，周益强,等.孕母IgG抗体效价与新生儿溶血病发病率的相关性研究.中国妇幼保健，2009,24:71-72.
2 Drabik-Clary K，Reddy VV，Benjamin WH,et al．Severe hemolytic disease of the newborn in a group B African-American infact delivered by a group O mother.Ann Clin Lab Sci,2006,36:205-207．
3 中华人民共和国卫生部医政司．全国临床检验操作规程．第3版．南京：东南大学出版社，2006:66-270.
4 薛辛东，杜立中，毛萌.儿科学.第2版.北京：人民卫生出版社，2011:138-139.
5 曾红艳，郑平，汪宏燕.孕妇IgG抗体效价与新生儿ABO血型不合溶血病的关系.中国新生儿科杂志，2014,29:261．
6 马晓露.孕母血型抗体与新生儿ABO溶血病发生的相关性分析.中国实验诊断学，2009,13:1745-1746.
7 朱莹，王靖.微柱凝胶技术检测521例O型血孕妇IgG抗A(B)效价.检验医学与临床，2013,1:33-34.
8 Yousuf R,Abdul Aziz S,Yusof N,et al. Hemolytic disease of the fetus and newborn caused by anti-D and anti-S alloantibodies: A case report. J Med Case Rep,2012,6:71.
9 朱亦，薛俭成.母婴ABO血型不合对HDN的影响.实用医技杂志，2006,13：2588.
10 邵肖梅，叶鸿瑁，丘小汕.实用新生儿学．第4版．北京：人民卫生出版社，2012：605．