卵巢癌是常见的妇科恶性肿瘤，5年生存率较低，患者常伴有大量的腹水，目前研究证实血管内皮生长因子(VEGF)在肿瘤淋巴、血行转移过程中发挥重要调控作用[1-2]，并成为肿瘤患者预后判断的参考指标之一[3]。本文采用ELISA方法检测卵巢癌患者腹水中VEGF的水平，评估其对卵巢癌的病情检测及预后评估的价值。
对象与方法
一、对象
收集武汉市商业职工医院及武汉大学人民医院2008年1月—2014年10月住院的卵巢癌患者术前腹水共148例作为卵巢癌组，良性卵巢上皮性肿瘤66例作为良性组。卵巢癌组平均年龄 (52.85±11.51)岁，组织学类型：浆液性癌94例，粘液性癌29例，内膜样癌18例，透明细胞癌7例。FIGO分期：Ⅰ期27例，Ⅱ期13例，Ⅲ期85例，Ⅳ期23例。组织学分级：G1为48例，G2为44例，G3为56例。卵巢癌患者随访2年，平均生存期为(14.26±0.74)月。良性组66例中浆液性43例，粘液性23例；平均年龄(38.40±9.47)岁。
二、方法
1.标本采集：腹水经腹腔穿刺术采集。标本采集后，立即3 000 r/min, 离心15 min，取上清，按每次用量分装后置-70℃冰箱冻存待测。上述操作均在4℃环境下进行。
2.VEGF含量测定：采用ELISA法测定，VEGF试剂盒为美国R&D公司产品。操作步骤严格按照说明书进行，采用国产Digiscan SA1000酶标仪(波长450 nm)比色定量。对VEGF含量在标准曲线最高值以外的标本稀释10～100倍后重新测定。所有标本均做双管检查。
3.统计学处理：应用SPSS 17.0统计软件分析实验结果，两组之间均数比较用t检验，多个样本间的均数比较用单因素方差分析(one-way ANOVA)，生存率评估采用Kaplan-Meier法，生存率之间的比较采用Log-Rank检验，多因素分析采用Cox回归，以P<0.05为检验标准，表示差异有统计学意义。
结 果
一、VEGF在卵巢癌及良性卵巢上皮性肿瘤腹水中的表达
卵巢癌组腹水中VEGF表达水平为(909.16±583.15)pg/ml，显著高于良性组的表达水平(258.13±127.82)pg/ml，两组比较，差异有统计学意义。
二、卵巢癌腹水VEGF与临床病理指标之间的关系
卵巢癌腹水VEGF的表达与淋巴结转移及临床分期相关，而与患者年龄、肿瘤大小、组织分级、组织学类型无关。见表1。
三、卵巢癌腹水VEGF水平与生存期之间的关系
随访2年，对患者进行生存期分析，以VEGF 613.38 pg/ml(cut-off 值)将患者分为两组。结果显示卵巢癌腹水中VEGF高表达患者(≥613.38 pg/ml)的生存期[(9.98±0.68)月]明显低于VEGF表达水平低的患者[( 23.64±0.65)月]，两者差异有统计学意义。生存曲线如图1所示。
四、单因素及多因素回归分析
通过对患者生存影响因素的分析，结果显示无论从单因素及多因素方面，腹水VEGF表达水平与卵巢癌患者的生存期明显相关(P<0.001)，可成为判断患者预后的独立影响因素。见表2。
表1 卵巢癌腹水VEGF与临床病理指标之间的关系
注：*P<0.05
图1 卵巢癌患者腹水VEGF表达水平的生存曲线
表2 卵巢癌腹水患者生存单因素及多因素分析
注：a为多因素COX回归；b 为Log-rank 检验；c为单因素COX回归
讨 论
恶性腹水是肿瘤细胞腹膜腔浸润和转移的结果，是肿瘤患者死亡的主要原因之一。VEGF是一种具有高度特异性的血管内皮分裂原，能诱导血管内皮细胞分裂增生，增强毛细血管的通透性。VEGF还是一个二聚体糖蛋白生长因子家族，其成员包括7种分泌的糖蛋白 VEGF-A～F、PIGF [4]。目前研究证实血管内皮生长因子在肿瘤淋巴、血行转移过程中发挥重要调控作用，并成为肿瘤患者预后判断的参考指标之一。研究也证实组织中VEGF表达与卵巢癌患者预后不良正相关[5-6]。一系列回顾性研究显示卵巢癌患者血清VEGF值有望成为独立预后指标[7-9]。Alcutagawa等[10]用SU6668 即VEGFR2 阻断剂，治疗人卵巢癌细胞79(HOC79) 转染的裸鼠所形成癌性腹水模型，200 mg/ kg/ d , 结果与对照组相比腹水量减少,肿瘤负荷降低，抑制了肿瘤在腹腔的扩散及腹水量的增加。Mendel等[11]构建了表达sFlt1的重组腺病毒载体,将其转导RMG人卵巢癌细胞,从sFlt21表达细胞收集的介质，明显抑制人脐带血管内皮细胞增殖。给雌性BALB/c裸鼠接种表达细胞，裸鼠腹水溶液平均体积和漏出红细胞数、肿瘤细胞数，明显比对照组减低，生存时间延长。这是因为sFlt21竞争性结合循环VEGF消耗了肿瘤细胞产生的VEGF，阻断其信号转导。VEGF拮抗剂应用于临床早期治疗卵巢癌腹水也已初见成效[12-13]。临床工作中，笔者发现卵巢癌患者常伴有大量的腹水且预后较差，为此本文采用ELISA方法检测卵巢癌患者腹水中VEGF的水平，评估其对卵巢癌的病情检测及预后评估的价值。
本结果显示，VEGF在卵巢癌患者腹水的表达明显高于良性卵巢上皮性肿瘤腹水患者，提示VEGF拮抗剂在治疗卵巢癌腹水患者中的前景良好。通过对VEGF值与卵巢癌腹水患者临床病理相关指标的相关分析，发现腹水中VEGF的值与淋巴结转移及临床分期密切相关。通过对卵巢癌患者生存期的分析，结果显示卵巢癌腹水中VEGF高表达患者(≥613.38 pg/ml)的生存期明显低于VEGF含量低的患者。进一步进行单因素及多因素对患者短期生存期的影响分析，结果显示VEGF值可成为评估患者预后的独立指标。本研究随访时间不长，VEGF在卵巢癌腹水患者预后及治疗中的评估作用还有待大样本及随访资料的支持。
综上所述，VEGF作为一种重要的促血管生成因子，对于卵巢癌腹水患者病情监测及治疗中起着重要的作用，随着对VEGF的深入研究，必将给卵巢癌患者带来新的希望。
参考文献
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