宫颈癌是临床常见的妇科恶性肿瘤之一，多数患者就诊时已发生局部或远处转移。研究发现肿瘤细胞的转移过程可能采用了与调节白细胞转运的相似的趋化因子介导机制[1]。Fractalkine 是CX3C类趋化因子家族中的唯一成员，具有趋化和黏附白细胞游走和活化功能，介导免疫损伤，而趋化因子Fractalkine介导白细胞的迁移是通过与靶细胞CX3CR1受体相互结合来发挥生物学作用[2]。近年来，研究发现Fractalkine与CX3CR1结合介导癌细胞与内皮细胞的黏附浸润和转移[3]。目前关于Fractalkine在肺癌、前列腺癌、胃癌等恶性肿瘤中的作用已有相关报道[4]，而在宫颈癌中研究尚未见报道。本文旨在通过检测Fractalkine及其受体CX3CR1在宫颈癌患者血清中的表达，探讨其在宫颈癌侵袭转移中的作用。
对象与方法
一、对象
选取从2013年1月—2015年6月在本院病理诊断的宫颈癌患者40例(宫颈癌组)及宫颈上皮内瘤变(CIN)患者30例(CIN组)。其中CIN组低度鳞状上皮内病变(LSIL)16例，高度鳞状上皮内病变(HSIL)14例，年龄35～67岁，平均年龄(52.4±9.1)岁。宫颈癌组患者年龄39～78岁，平均年龄(54.8±10.2)岁；病理组织类型为鳞癌25例，腺癌15例；根据2014年国际妇产科联盟(FIGO)分期标准进行宫颈癌临床分期，其中Ⅰ期14例，Ⅱ期14例，Ⅲ期7例，Ⅳ期5例；按组织病理学分级分为高分化15例，中分化12例，低分化13例；有淋巴结转移者16例，无转移者24例。纳入标准为首次经病理学确诊的原发性宫颈癌；入组患者均排除妇科内分泌及炎症等疾病以及其他肿瘤疾病。另选取同期门诊及体检与宫颈癌年龄相匹配的健康体检者20例作为正常对照组，其中年龄31～62岁，平均年龄(51.3±8.7)岁。各组之间一般资料具有可比性。见表1。
表1 一般临床资料的比较
二、方法
1.标本采集：所有受试者于清晨空腹采集静脉血4 ml，于4 ℃条件下3 000 r/min，离心10 min，取上清液编号后分装于EP管中，置-80 ℃冰箱保存，集中待测。
2.血清Fractalkine和CX3CR1检测：采用酶联免疫吸附法(ELISA)对血清Fractalkine、CX3CR1进行检测。人Fractalkine(Fractalkine)ELISA试剂盒购自美国RayBiotech公司，人CX3C趋化因子受体1(CX3CR1)ELISA试剂盒购自北京易科攀搏生物科技有限公司。严格按照说明书进行操作。使用酶标仪(450 nm)测量各孔的吸光度(OD值)。通过标准曲线计算样品浓度。
3.统计学处理：应用SPSS18.0统计学软件进行处理，计量资料以
表示，两组均数之间比较采用t检验，三组间均数比较采用方差分析，三组间两两比较采用SNK等方差分析。相关性采用Spearman相关分析。P<0.05为差异有统计学意义。
结 果
一、各组血清Fractalkine和CX3CR1的表达水平
三组血清Fractalkine、CX3CR1表达水平比较，差异有统计学意义；宫颈癌组血清Fractalkine、CX3CR1表达水平均明显低于正常组及CIN组，差异有统计学意义；正常组与CIN组比较差异均无统计学意义。此外，CIN组LSIL患者血清Fractalkine表达水平、CX3CR1表达水平均高于HSIL患者，差异均有统计学意义。见表2。
表2 各组血清Fractalkine和CX3CR1的表达水平
注：三组比较，*P< 0.05；与正常组比较，aP<0.05；与HSIL比较，bP<0.05
二、血清Fractalkine和CX3CR1与宫颈癌临床病理特征的关系
宫颈癌无淋巴结转移组血清Fractalkine、CX3CR1表达水平均明显高于淋巴结转移组，差异均有统计学意义；宫颈癌血清Fractalkine和CX3CR1水平表达与其病理类型及分化程度无显著相关(P>0.05)；而与FIGO分期、淋巴结转移有关(P<0.05)。见表3。
表3 血清Fractalkine水平与宫颈癌临床病理特征的关系
注：*P<0.05
三、Fractalkine和CX3CR1在宫颈癌血清中表达的相关性
通过直线相关分析，在宫颈癌中，血清Fractalkine和CX3CR1表达水平呈正相关(rs=0.371，P=0.018)。
讨 论
趋化因子是一类可趋化、吸引并激活炎症细胞、参与炎症反应的细胞因子，通过迁移巨噬细胞、NK细胞和淋巴细胞向肿瘤局部转移，激活宿主的免疫应答，杀伤肿瘤细胞从而抑制肿瘤的发生和发展。Fractalkine是CX3C类趋化因子中唯一成员，在炎症状态下，可溶性Fractalkine可有效促进单核细胞、淋巴细胞的迁移。CX3CR1是Fractalkine特异性受体，主要表达于单核细胞、NK细胞、Th细胞等，两者结合后在血管生成、抗肿瘤免疫及肿瘤的生长浸润转移等方面发挥着重要的生物学效应[2]。Fractalkine及其受体CX3CR1之间的信号转导通路也成为肿瘤免疫治疗关注的热点。
目前，有关Fractalkine及其受体CX3CR1在肿瘤的作用研究相对较少，已有的研究表明Fractalkine及其受体CX3CR1参与了不同的肿瘤的发生发展过程[5]。在一些肿瘤中，Fractalkine及其受体CX3CR1的高表达，提示肿瘤患者预后越好。较早的研究发现，胃癌根治术后Fractalkine高表达患者较对照组有较小的转移率和复发率[6]。Celesti等[7]通过免疫组化方法发现，Fractalkine及CX3CR1在胰腺导管腺癌中的阳性表达率低于胰腺上皮内瘤。CX3CR1表达越高，患者的预后越好，说明CX3CR1早期参与阻止胰腺导管腺癌的进展，是阻止癌变潜在的靶点。但也有一些肿瘤中，Fractalkine及其受体CX3CR1的作用正相反。Lv等[8]研究发现，Fractalkine、CX3CR1在胃癌组织中表达明显高于癌旁组织，嗜神经浸润组Fractalkine、CX3CR1在胃癌组织中表达显著高于无嗜神经浸润组，表明，Fractalkine、CX3CR1与胃癌的发生发展有关。Wei等[9]研究发现，CX3CR1在胃癌组织中高表达，并且与淋巴结转移、临床TNM分期和肿瘤大小有关。CX3CR1过表达促进了胃癌细胞的转移、侵袭、增殖和存活。Tsang等[10]研究发现，在乳腺癌中，Fractalkine表达与肿瘤浸润淋巴细胞密切相关。此外，Fractalkine还与乳腺癌不良预后标志物，包括淋巴结转移、Ki67高表达等呈正相关。Fractalkine表达越高，预后越差。在前列腺癌中，缺氧会导致Fractalkine的分泌和表达,促进了细胞增殖,加速前列腺癌细胞的细胞周期进程,表明Fractalkine可能作为一种潜在的治疗前列腺癌的靶点[11]。由于Fractalkine及其受体CX3CR1在不同的肿瘤表面表达不尽相同，在一些肿瘤中，高表达Fractalkine 有着较好的预后和无病生存率，而在另一些肿瘤中则相反。以上这些结果显示了Fractalkine及其受体CX3CR1在肿瘤进展中的复杂机制，需要进一步的研究来阐明其抗肿瘤及促肿瘤的作用，有利于了解其预后判断和治疗价值。
曹宝森等[12]在肺癌患者血清Fractalkine水平与临床病理特征关系中研究中发现，肺癌组血清Fractalkine含量明显高于正常组。Fractalkine含量与淋巴结转移、脉管内癌栓、浸润肺膜密切相关。血清学检测Fractalkine可预测肿瘤的转移潜能。在妇科肿瘤方面，张丽娜等[13]研究发现，在子宫内膜癌中，Fractalkine参与选择性白细胞的趋化、迁徙、归巢,其在子宫内膜炎症的发生、抗肿瘤免疫反应中起重要作用,可能是子宫内膜恶性转化的一个相关因素。CIN是与宫颈浸润癌密切相关的一组癌前病变,它反映宫颈癌发生发展中的连续过程。前期笔者针对CIN分级患者进行研究发现，CIN组LSIL患者血清Fractalkine、CX3CR1表达水平明显高于HSIL患者表达水平，提示Fractalkine、CX3CR1表达随着CIN分级的增加而降低，可能参与了CIN病变过程。而在宫颈癌组血清Fractalkine、CX3CR1表达水平明显低于正常宫颈组与CIN组，无淋巴结转移组血清Fractalkine、CX3CR1表达水平均明显高于淋巴结转移组,差异有统计学意义。Fractalkine、CX3CR1的低表达与宫颈癌FIGO分期、淋巴结转移密切相关，与宫颈癌病理组织类型、分化程度无显著相关。肿瘤细胞低表达Fractalkine，免疫细胞不能有效地迁移到肿瘤微环境中杀伤肿瘤细胞，从而肿瘤细胞得以逃避宿主的免疫攻击，造成不良预后和生存率降低，说明Fractalkine、CX3CR1在宫颈癌进展过程中可能起了重要作用，并与肿瘤浸润、淋巴结转移关系密切。此外,本研究结果显示在宫颈癌中血清Fractalkine和CX3CR1表达水平呈正相关，如果能进一步阻断Fractalkine与其受体CX3CR1之间的信号转导途径将可抑制肿瘤的生长和转移。
总的来说，Fractalkine与其受体CX3CR1与宫颈癌的侵袭和淋巴结转移密切相关，在宫颈癌发生发展过程中可能发挥了重要作用。
参考文献
1 D’Haese JG,Friess H,Ceyhan GO.Therapeutic potential of the chemokine-receptor duo fractalkine/CX3CR1: an update.Expert Opin Ther Targets,2012,16:613-618.
2 李锋,王作仁.Fractalkine与肿瘤.现代肿瘤医学,2009,17:988-990.
3 Ferretti E,Pistoia V,Corcione A.Role of fractalkine/CX3CL1 and its receptor in the pathogenesis of inflammatory and malignant diseases with emphasis on B cell malignancies.Mediators Inflamm,2014,2014:480941.
4 徐亚辉,汪宏波,王泽华.趋化因子Fractalkine在肿瘤治疗中的研究进展.实用肿瘤学杂志,2009,23:371-374.
5 Zheng J,Yang M,Shao J,et al.Chemokine receptor CX3CR1 contributes to macrophage survival in tumor metastasis.Mol Cancer,2013,12:141.
6 Hyakudomi M,Matsubara T,Hyakudomi R,et al.Increased expression of fractalkine is correlated with a better prognosis and an increased number of both CD8+T cells and natural killer cells in gastric adenocarcinoma.Ann Surg Oncol,2008,15: 1775-1782.
7 Celesti G,Di Caro G,Bianchi P,et al.Early expression of the fractalkine receptor CX3CR1 in pancreatic carcinogenesis.Br J Cancer,2013,109:2424-2433.
8 Lv CY,Zhou T,Chen W,et al.Preliminary study correlating CX3CL1/CX3CR1 expression with gastric carcinoma and gastric carcinoma perineural invasion.World J Gastroenterol,2014,20:4428-4432.
9 Wei LM,Cao S,Yu WD,et al.Overexpression of CX3CR1 is associated with cellular metastasis,proliferation and survival in gastric cancer.Oncol Rep,2015,33: 615-624.
10 Tsang JY,Ni YB,Chan SK,et al.CX3CL1 expression is associated with poor outcome in breast cancer patients.Breast Cancer Res Treat,2013,140:495-504.
11 Tang J,Chen Y,Cui R,et al.Upregulation of fractalkine contributes to the proliferative response of prostate cancer cells to hypoxia via promoting the G1/S phase transition.Mol Med Rep,2015,12:7907-7914.
12 曹宝森,李霞,常茂叶,等.外周血IL-8和Fractalkine表达与非小细胞肺癌病理特征的关系.河北医科大学学报,2013,34:757-760.
13 张丽娜,关宏,周炳娟,等.子宫内膜腺癌趋化因子Fractalkine的阳性表达及临床意义.中国妇幼保健,2012,27:903-904.