宫颈炎是育龄期妇女宫颈最常见的疾病之一，国内有文献报道说女性中有60%～80%的人一生中曾患过宫颈炎[1]。部分患者的病原体至今尚不清楚。目前，对于解脲支原体(Ureapiasma urealyticum，Uu)及人型支原体(M.homimis，Mh)在宫颈炎发生、发展中是否起到作用而引起了国内外重视。然而，对支原体在宫颈炎中的致病性的认识比较混乱，一部分表现为“过度治疗”，即给每位宫颈炎患者均做各型支原体检测，只要有支原体阳性，就都给予抗支原体抗炎药物治疗，直至支原体转阴，治疗时间长，给患者造成了恐惧和负担。另一部分表现为“过度轻视”，则不进行任何支原体的检测和治疗。本文通过比较宫颈炎患者与非宫颈炎女性宫颈管解脲支原体及人型支原体检出情况，分析两者对宫颈炎致病的相关性，为临床对宫颈炎患者进行解脲支原体及人型支原体的诊治提供参考。
材料与方法
1.试剂及仪器：解脲支原体和人型支原体培养鉴定药敏一体化试剂盒[迪尔支原体(Uu/Mh)分离培养药敏试剂盒，20人份/盒，珠海迪尔生物工程有限公司]；灭菌水(2 ml/支灭菌注射用水，北京市永康药业有限公司)、生理盐水(0.9%氯化钠注射液，50 ml/袋，山东高威集团医用分子制品有限公司)；恒温培养箱(上海精宏SHP-080微生物生化培养箱，上海圣科仪器设备有限公司)；显微镜(MODEL CH20BIMF200 JAPAN OLYMPUS OPTICAL CO.LTD)。
2.研究对象：2015年1月—2015年10月就诊于山西大医院妇产科门诊确诊为宫颈炎的52例患者作为研究组，平均年龄为(32.9±4.3)岁，同期于山西大医院妇产科门诊就诊非宫颈炎患者31例作为对照组，平均年龄为(31.6±5.6)岁。入选对象近1周未进行过抗生素局部或全身用药，宫颈未进行任何处理，近3天内无性生活。研究组中阴道炎患者(63.5%，33/52)与对照组中阴道炎患者(48.4%，15/31)比较，差异无统计学意义。
研究组宫颈炎按照第八版妇产科教材宫颈炎的诊断标准[2]，入组标准包括(1)有宫颈炎的临床表现，阴道分泌物增多、瘙痒等，置窥器可见宫颈口附着黄色粘稠分泌物或宫颈口流出稀薄黄色液体，或粘膜质脆，易出血，或宫颈充血、宫颈息肉；(2)外阴、阴道无充血，宫颈或阴道分泌物白细胞>10/高倍镜视野；(3)同时行宫颈液基细胞学检查(TCT)及HPV检测，结果提示无异常；(4)无糖尿病、免疫性疾病等其他疾病，无长期服用抗生素、糖皮质激素、免疫抑制剂等药物。
对照组入组标准包括(1)宫颈无充血、水肿，无宫颈息肉等改变；(2)宫颈口无异常分泌物附着及自宫颈口流出，宫颈周围无异常分泌物附着；(3)同时行宫颈液基细胞学检查(TCT)及HPV检测，结果提示无异常；(4)无糖尿病、免疫性疾病等其他疾病，无长期服用抗生素、糖皮质激素、免疫抑制剂等药物。
3.取材方法：无菌棉拭子在阴道侧壁中上1/3处，取分泌物行涂片检查。无菌棉拭子(头端)深入宫颈口内约1cm，旋转1圈，停留60 s取出，置入无菌管行支原体培养及鉴定(整个操作过程中无菌棉拭子未接触除宫颈外任何其他部位或物品)。
4.阴道分泌物涂片检查：(1)病原菌检测。在低倍镜下直接查找病原菌,主要查找阴道毛滴虫、假丝酵母菌菌丝及孢子、线索细胞等，并用以结合判断阴道清洁度;(2)清洁度测定。在显微镜调至油镜下阴道分泌物进行分度，Ⅰ度主要为杆菌、可见大量的上皮细胞；Ⅱ度为部分杆菌，出现部分脓细胞和杂菌；Ⅲ度为少数的上皮细胞和杆菌，可见其他杂菌和大量的脓细胞；Ⅳ度未见杆菌，少许上皮样细胞，满视野几乎都是脓细胞和杂菌。
5.支原体培养：首先，将试剂盒放置在室温中，使其温度接近室温；将含有宫颈分泌物的标本分别置于解脲支原体培养基及人型支原体培养基中(注意整个过程中的无菌操作，避免标本受污染，结果出现假阳性)；将培养瓶放置于35℃～37℃培养箱内培育24～48 h，观察结果。
结果判读严格按照试剂盒的标准判读，减少假阳性的出现，同时行药敏实验。解脲支原体的培养液变为清澈透明红色为阳性，若其不变色(黄色)为阴性，阴性者可继续培养至48 h，若仍不变色，可判断为阴性。人型支原体的培养液变为清澈透明红色为阳性，若其不变色(黄色)为阴性，而阴性者标本可培养至72 h，若仍不变色，可判断为阴性。
6. 统计学处理：应用SPSS17.0统计软件，计数资料采用率表示，率的比较采用χ2检验，计量资料采用
表示，统计分析应用方差分析，当P<0.05认为差异有统计学意义。
结果
1.两组支原体检出情况比较：两组支原体检出比较，差异无统计学意义。两组解脲支原体、人型支原体、解脲支原体合并人型支原体的检出率比较，差异均无统计学意义。见表1。
表1研究组和对照组支原体检出比较
2.两组不同支原体检出情况比较：两组检出的支原体主要是解脲支原体，其中研究组20例(71.4%)，对照组11例(68.8%)。单纯人型支原体，研究组3例(10.7%)，对照组2例(12.5%)；解脲支原体合并人型支原体，研究组共计5例(17.9%)，对照组3例(18.7%)。见表2。
表2研究组和对照组各支原体总体检数和构成比
3.各级阴道清洁度中宫颈支原体感染情况：宫颈支原体感染患者阴道清洁度主要在Ⅲ度以上，阴道清洁度为Ⅱ度阳性患者2例(10.5%)，Ⅲ度者22例(62.9%),IV度者20例(69.0%)。Ⅱ度支原体检出率与Ⅲ度、IV度的差异有统计学意义，Ⅲ度支原体检出率与IV度差异无统计学意义。见表3。
表3宫颈支原体感染在不同阴道清洁度的分布
注：分别与Ⅲ度、IV度比较，*P<0.05
讨论
宫颈炎症是妇科的一种常见多发疾病，对女性健康具有一定影响。部分患者甚至影响生活质量，严重的宫颈炎还可引起病原微生物上行感染，引起子宫内膜的炎症、输卵管炎、盆腔炎等，甚至可导致尿道炎等泌尿生殖道综合症[3-5]等疾病。因此，及时的诊断和治疗非常重要。然而，由于部分宫颈炎患者的临床症状不明显，或与阴道炎症状相同及部分宫颈炎的病原菌至今不清楚，导致目前临床上在诊断和治疗宫颈炎方面存在很多误区和不规范现象。再者，对宫颈炎病原微生物的认识不够，多为经验性治疗，不能针对相应病原菌作出对症治疗。对于反复性、难治性宫颈炎的诊治仍存在困难，难以确定其致病因素、病原微生物。因此，筛选出罹患宫颈炎的高危因素，明确宫颈炎症的致病微生物，对于宫颈炎的诊断及治疗十分重要。
支原体是缺乏细胞壁、细胞大小介于细菌与病毒之间的原核微生物，能自行繁殖、独立存活。到目前，从人体分离出的支原体已达十多种，其中已经肯定的对人具有致病作用的支原体有6种，包括肺炎支原体(M.pleuropneumonia，Mp)、发酵支原体(M.fermentaus，Mf)、梨支原体(Mycopiasma pirum，Mpi)、生殖支原体(M.genitalium，Mg)、解脲支原体、人型支原体。目前，已知的解脲支原体也具有一定的致病性，可导致非淋菌性尿道炎、绒毛膜羊膜炎、自然流产、新生儿肺炎、脑膜炎等，人型支原体目前已确定可引起盆腔感染、新生儿脑膜炎、脑脓肿等。而对于解脲支原体和人型支原体若寄居于宫颈，是否能引起宫颈炎症这一课题受到国内外研究的关注。
本文研究结果提示，研究组解脲支原体及人型支原体的检出率和对照组比较，差异无统计学意义。解脲支原体及人型支原体可能为能够寄生于宫颈的正常菌群之一，可为正常人携带。本研究发现，宫颈支原体寄居中以单纯解脲支原体为主，占70%左右，与国内外多数研究者的报道相符[3-6]。解脲支原体属于柔膜体纲微生物，主要寄生于泌尿生殖道，其分为14个血清型，根据分子生物学特征又分为A、B两群，A群解脲支原体均含有16kDa和17kDa的多肽(2、4、5、7、8、9、10、11、12型)，B群的各血清型仅含有17kDa的多肽(1、3、6、14)，其中13血清型仅含有16kDa的多肽，且仅对Mn2+敏感，故可既列入A群，也可列入B群[7]。由于解脲支原体多种血清型的存在，本研究结果表明，宫颈解脲支原体(总体血清型)的寄居与宫颈炎症的发生无明显相关性，而14个血清型中是否部分可引起宫颈炎，而部分不具有致病性，还需将来做进一步研究。
本研究结果提示，宫颈支原体的寄居与阴道分泌物的清洁度具有一定的相关性，清洁度级别高，支原体寄居率则增大。阴道清洁度是分泌物检查的常规项目，是在显微镜观察分泌物，来确定阴道的微生态状况，可作为有无炎性反应的判断，部分还能对炎性反应的原因做出诊断。阴道清洁度分为四度，其级别越高，阴道正常寄生菌越少，致病菌、杂菌、脓细胞越多。正常阴道内并非无菌环境，其内寄居者多种微生物，形成正常微生物群，维持阴道生态平衡。阴道正常的微生态中，是以杆菌为主，其数量可占阴道寄居所有微生物总数的95%以上，是育龄期女性正常微生物群的优势菌，其中又以能产生过氧化氢(H2O2)的乳酸杆菌最为优势[2]。在乳酸杆菌、雌激素及pH的共同调节下维持正常的阴道生态平衡。当阴道受到病原微生物的感染，或寄生于阴道的条件致病菌增多并成为优势菌时，那么阴道的微生态将失去平衡，便可出现炎症，阴道分泌物的检测中结果表现为杆菌减少，尤其是乳酸杆菌，杂菌及白细胞数目的增多，有的可见典型的病原体，也就是说阴道的清洁度在一定程度上可反映阴道微生态的状况，清洁度级别越高，阴道生态失衡可能越严重。也就是说当阴道清洁度到Ⅲ、IV度时，阴道自净作用下降，正常阴道微生态遭到破坏，其他菌群的寄生、感染的几率就大大增加了，而宫颈与阴道是相延续的，支原体也就可能趁机寄生于宫颈，因此，出现了宫颈支原体的寄居与阴道清洁度的相关性。
综上所述，宫颈炎患者及非宫颈炎女性宫颈均可有解脲支原体及人型支原体的寄居，二者无明显差异。总体上来说，解脲支原体和人型支原体与宫颈炎症的发生没有明显的相关性，但是由于解脲支原体可分多种血清型，故不能排除解脲支原体中某种血清型与宫颈炎症发生的相关，为宫颈炎的致病微生物。解脲支原体及人型支原体在宫颈的寄生与阴道清洁度具有一定的相关，清洁度高，支原体寄生的几率越高，也就是说其寄生与阴道微生态相关，当阴道微生态遭到破坏而失去平衡时，解脲支原体及人型支原体在宫颈的寄居率升高。
本次课题的研究，只是进行了解脲支原体和人型支原体定性的检测，并没有对其进行定量检测及解脲支原体的14个血清学型进行分型检测，存在一定局限性。对于解脲支原体分型检测将是下一步研究的重点。
参考文献
1 云玉香.浅谈慢性宫颈炎的临床治疗进展.当代医药论丛,2014,12:11-12.
2 谢幸，苟文丽,主编.妇产科学.第八版.北京:人民卫生出版社,2013.
3 陈建祎，陈玲玲，沈华.宫颈炎患者支原体感染相关因素分析及预防策略.实用预防医学,2015,22:200-202.
4 Taylor-Robinson D,Lamont RF.Mycoplasmas in pregnancy.BJOG,2011,118:164-174.
5 王子峰，陆丽.236例女性生殖道分泌物支原体培养及药敏分析.中国医药指南,2016,14:25.
6 王晓丽,赵卫东.女性泌尿生殖系统感染支原体的研究进展.中国妇幼保健,2014,29:156-158.
7 曹玉璞,叶元康主编,支原体与支原体病.北京:人民卫生出版社,2000.