表1 胎盘FTO蛋白在各组中的表达情况
组别例数阴性[例(%)]阳性[例(%)]低表达中表达高表达合计正常产妇 正常出生体重组1811(61.1)3(16.7)3(16.7)1(5.6)7(38.9) 巨大儿组158(53.3)3(20.0)2(13.3)2(13.3)7(46.7)GDM产妇 合并GDM正常体重组247(29.2)4(16.7)6(25.0)7(29.2)17(70.8) 合并GDM巨大儿组332(6.1)7(21.2)9(27.3)15(45.5)31(93.9)
·妇幼保健·
代谢性疾病比如肥胖、糖尿病等都是由于能量过剩，长期伏案的生活以及遗传易感性引起的。妊娠期糖尿病(gestational diabetes mellitus,GDM)定义为妊娠后首次出现的糖尿病[1]。有研究[2-3]表明，GDM对后代健康影响很大，后代肥胖的发病率高达10倍，糖耐量异常在青春期发病率高达4倍。胎盘中肥胖相关性基因(fat mass and obesity-associated gene,FTO)是一个与肥胖性疾病关系密切的基因，FTO基因突变将会导致体重增加[4]。本文将通过免疫组化方法检测胎盘中FTO蛋白表达，旨在研究GDM与胎盘FTO表达的关系，以及FTO表达与新生儿出生体重之间的关系。
1. 一般资料：选择2016年5月～2017年3月山西医科大学第一医院进行产前检查并正常分娩的57例GDM产妇和33例正常产妇，其中GDM产妇平均年龄为(27.0±2.41)岁，孕(38.0±1.1)周；正常产妇平均年龄为(27.5±2.4)岁，孕(38.1±1.2)周。再将两组产妇胎盘按新生儿出生体重分为正常体重组和巨大儿组。其中，巨大儿是指出生体重大于4 000 g；正常体重儿是指出生体重在2 500～4 000 g之间。共分为4组，其中正常体重组18例，巨大儿组15例，合并GDM正常体重组24例，合并GDM巨大儿组33例。GDM诊断标准参照(IAPNSG2010)妇产科第八版教材标准[5]，75 g葡萄糖行口服葡萄糖耐量试验(OGTT)，即空腹血糖≥5.1 mmol/L，1h血糖≥10.0 mmol/L，2 h 血糖≥8.5 mmol/L，任意一点血糖值异常即可诊断为GDM。本研究经山西医科大学第一医院伦理委员会批准，并获得产妇的知情同意权。
2. 主要试剂:兔抗人FTO多克隆抗体购自福州迈新生物技术开发有限公司；DAB显色试剂盒购自武汉博士德生物工程有限公司。
3. 方法：免疫组化SP法检测所有产妇胎盘娩出后立即于胎盘滋养层组织剪取0.5 cm × 1.0 cm × 1.0 cm的胎盘组织，置于中性福尔马林溶液浸泡24 h，脱水、透明、石蜡包埋、4 μm切片。一抗为兔抗人FTO抗体，稀释度1∶300，相关操作严格按照说明书进行。
4. 判定标准：FTO以胎盘滋养细胞的胞核染成黄棕色或黄褐色均匀颗粒为阳性表达。高倍显微镜下随机观察5个视野，每个视野计数100个细胞计算百分比，阳性细胞1%～25%为1分，26%～50%为2分，51%～75%为3分，76%～100%为4分。阳性强度，无色为0分，淡黄色为1分，黄色为2分，棕黄色为3分；上述两项分数相加后0分为-，2～3分为+，4～5分为++，6～7分为+++，免疫组化结果判定由山西医科大学第一医院两位老师共同完成，阳性表达率为低、中、高阳性表达率之和。
5. 统计学处理：应用SPSS19.0进行统计学分析。计量资料采用均数±标准差表示，采用卡方检验比较各组FTO蛋白表达情况，以P<0.05为差异有统计学意义。
胎盘FTO蛋白在正常出生体重组、巨大儿组、合并GDM正常体重组、合并GDM巨大儿组4组中均有阳性表达，阳性表达率分别是38.9%、46.7%、70.8%、93.9%。正常出生体重组与巨大儿组相比，胎盘FTO蛋白表达差异无统计学意义；合并GDM正常出生体重组较正常体重组胎盘FTO蛋白表达明显增加，合并GDM巨大儿组较巨大儿组胎盘FTO蛋白表达升高，合并GDM巨大儿组较正常出生体重组胎盘FTO蛋白表达明显升高，合并GDM巨大儿组胎盘FTO蛋白表达高于合并GDM正常体重组，以上差异均有统计学意义,合并GDM巨大儿组、合并GDM正常体重组FTO蛋白阳性表达与新生儿体重呈正相关(Z=3.977，P=0.046)。见表1、图1。
2007年通过全基因组关联研究(genome-wide association study,GWAS)法筛查了正常人常染色体基因组490 032个SNP位点，确定了普通人群肥胖的候选基因是肥胖相关性基因(fat mass and obesity-associated gene,FTO)[6]。FTO蛋白位于染色体16q12-q24，全长400 kb，是一类脱氧核糖核酸去甲基化酶。研究[7-8]证实，FTO遗传变异(rs9939609)与肥胖表型密切相关，并且FTO基因的SNPs可影响成人和儿童的BMI，与体重增长、摄食行为习惯有关。有研究[9]资料表明，胎儿宫内发育过程与遗传因素和宫内环境关系密切，从而导致胎儿生长发育异常。
本研究表明，合并GDM正常体重组FTO蛋白阳性表达率高于正常出生体重组，合并GDM巨大儿组FTO蛋白阳性表达高于巨大儿组，说明GDM孕妇胎盘FTO蛋白表达高于正常妊娠孕妇。Yang 等[10]通过meta分析研究FTO多态性与Ⅱ型糖尿病之间的关系，以及这种关联是否与FTO的基因片段有关，证实FTO基因片段rs9939609和rs8050136与Ⅱ型糖尿病患者关系密切，FTO基因片段增加了Ⅱ型糖尿病的风险，并且rs9939609和rs8050136在肥胖的发生发展中也发挥作用。而GDM患者也表现出肥胖、胰岛素抵抗，与Ⅱ型糖尿病的病理生理类似[11-13]。因此，胎盘FTO蛋白表达与GDM呈正相关[14]。另外，本研究发现，正常出生体重组FTO蛋白阳性表达与巨大儿组相比，差异无统计学意义；而合并GDM巨大儿组FTO表达高于巨大儿组，差异有统计学意义。这更加证实了GDM与FTO蛋白之间的关系。
本研究表明，GDM巨大儿组FTO蛋白阳性表达率高于GDM正常体重组，差异有统计学意义，两组胎盘中FTO蛋白阳性表达率与新生儿体重呈正相关，说明FTO蛋白表达与GDM新生儿体重有关联。张帆[15]通过荧光定量PCR检测80例GDM产妇和64例正常产妇胎盘组织FTO mRNA水平，并分析了两组FTO mRNA表达含量与新生儿出生体重之间的关系，发现GDM组FTO mRNA表达含量与新生儿体重和BMI呈正相关，FTO对胎儿体重有重要影响。有研究[16]发现，GDM孕妇后代发生肥胖、胰岛素抵抗、糖尿病以及心脑血管疾病的概率增加，GDM孕妇远期发生II型糖尿病的概率为17%～63%，而II型糖尿病糖尿病与体重指数增加关系紧密，有研究表明II型糖尿病与FTO基因有直接关系，FTO基因高表达是GDM后期并发II型糖尿病的高危因素[17]。
表1 胎盘FTO蛋白在各组中的表达情况
组别例数阴性[例(%)]阳性[例(%)]低表达中表达高表达合计正常产妇 正常出生体重组1811(61.1)3(16.7)3(16.7)1(5.6)7(38.9) 巨大儿组158(53.3)3(20.0)2(13.3)2(13.3)7(46.7)GDM产妇 合并GDM正常体重组247(29.2)4(16.7)6(25.0)7(29.2)17(70.8) 合并GDM巨大儿组332(6.1)7(21.2)9(27.3)15(45.5)31(93.9)
综上所述，本研究发现，GDM患者胎盘FTO蛋白表达显著升高，并且GDM孕妇娩出巨大儿的发生率大大提高，FTO蛋白阳性表达与新生儿体重呈正相关，但还不能确定健康产妇生产的巨大儿是由于FTO过度表达所致。随着研究进展，FTO不仅仅只是肥胖相关蛋白，将进一步揭示FTO基因与机体功能和疾病的关系，以期为糖尿病等代谢性疾病提供新的治疗靶点。
A：正常出生体重组；B：巨大儿组；C：合并GDM正常体重组；D：合并GDM巨大儿组
图1 FTO蛋白表达在四组胎盘组织中的表达情况(免疫组化SP法 ×200)
青春期泄殖腔畸形1例
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