唾液酸(sialic acid，SA )在植物中不存在，却大量存在于脊椎动物和高等无脊椎动物体内[1- 2]，如猪肉及牛肉[3]、鸡蛋中均有丰富的含量[4-5]。SA是人类大脑认知发育必要的营养素[6]，从营养学的角度来讲，SA是人类营养史上一类有益于脑发育的不亚于二十二碳六烯酸(docosahexaenoic acid，DHA)的新型营养素。目前，国内外针对乳汁SA营养的研究为数不多，多集中在乳汁SA的测定、人类乳汁与配方乳SA含量的区别等方面[7-8]。本课题与以往研究不同点在于研究哺乳期健康产妇饮食生活习惯对乳汁SA含量的影响，探讨产妇的不同饮食方式是否对乳汁SA有一定影响。因产妇饮食模式在哺乳阶段变化较小，故其有关的饮食模式分析可提供产妇所获得的营养摄入的信息[9-10]。本研究可为今后指导产妇合理膳食提高乳汁SA含量提供依据。
对象与方法
1.研究对象：经山西省妇幼保健院伦理委员会批准，按照“知情同意，自愿参加”的原则于2013年5月—2013年10月从山西省妇幼保健院产科门诊，采用单纯随机抽样排号法随机选取111例健康产妇，于其产后第30～40天采集母亲乳汁10～15 ml。
2.实验仪器：超速冷冻离心机，Sigma公司提供。HPLC，Agilent-1200型(带荧光检测器)，Agilent公司提供。主要试剂包括SA标准品，由 Sigma公司提供；色谱柱Waters C18 (2.5 μm,2.1 mm×150 mm)，Waters公司；保护柱Waters C18 (2.5 μm,2.1 mm×20 mm)，Waters公司。
3.方法：产妇的人口学特征及一般饮食习惯调查包括由培训过的医院营养师与产妇进行面对面询问，即时填写问卷，内容包括产妇近一周的饮食状况，如每周进食红肉、海产品、蛋类、蔬菜、水果、乳制品及豆类的次数等项目，问卷由2名专业人员同时对1位产妇进行评分，结果经相关性分析，二人信度r=0.71 ，P<0.01，问卷具有可信性。
4.乳汁的收集：由课题组人员亲自入户收集乳汁，产妇人工手法采集乳汁，采集母亲分娩后30 d的乳汁20 ml，时间点为早晨9点至10点，采集后立即放入备好的无菌冷藏盒带回并立即保存于-28 ℃冰箱备用。
5.乳汁唾液酸的测定：采用荧光-高效液相色谱法(fluorescence detector-high performance liquid chromatography，HPLC-FLD)测定。
6.色谱检测条件：流动相为甲醇-乙腈-超纯水(7∶8∶85)；流速为0.9 ml/min；进样体积10 μl；柱温30 ℃；荧光检测器激发波长373 nm，发射波长448 nm。每个样品均进样两次，于HPLC上检测两次，取两次峰面积的平均值作为测定结果。
7.制备标准曲线的工作液：将标准品混合母液依次等体积倍增稀释，配成七种不同浓度的溶液，供验证标准曲线线性关系使用。
8.统计学处理：计量资料结果以(均数±标准差)表示，应用SPSS 17.0软件对数据进行分析。按照哺乳早期乳汁SA含量的中位数719.4 mg/L分为(1)高SA组。即哺乳早期乳汁SA含量≥719.4 mg/L；(2)低SA组。即哺乳早期乳汁SA含量<719.4 mg/L。以乳汁SA水平高低两组为因变量，乳母摄入营养素为自变量，采用多因素Logistic逐步回归分析等统计方法。检验均采用双侧检验，α=0.05判别差异是否有统计学意义。
结果
1.产妇一般情况：产妇分娩年龄、产后出血时间、产妇受教育程度、产后情绪、产后食欲、有无被动吸烟史、身体质量指数(BMI)等指标结果，见表1。
表1产妇一般情况(n=111)
变量赋值说明：A.有无被动吸烟1=否，2=有；B.身体质量指数1=正常，2=超重；C.其余变量赋值均按照表格中分类顺序分别为1，2，3
2.乳汁SA检测结果：乳汁SA含量的平均值和标准差分别为714.3 mg/L和64.4 mg/L，高SA组60例，低SA组51例。
3.不同乳汁SA含量与饮食摄入习惯：结果显示通过单因素卡方检验，得到影响健康产妇SA的饮食习惯自变量有食用红肉、鸡蛋、海产品、乳制品及豆类的频率，两组比较，差异有统计学意义。结果见表2。
4.影响乳汁SA饮食习惯的多因素logistic回归分析：控制混杂因素，校正产妇分娩年龄、产后出血时间、产妇受教育程度、产后情绪、产后食欲、有无被动吸烟史、身体质量指数(BMI)等有可能影响乳汁分泌的混杂因素后，以乳汁SA水平高低两组为因变量，乳母摄入营养素为自变量，在α=0.05水平上进行多因素Logistic回归分析，得到产妇每周平均摄入红肉和牛乳的频率越高，同期产妇乳汁SA的浓度就越高(回归系数分别为1.466和0.692)，而OR值决定自变量作用的大小，所以每周食用红肉的频率对血清SA的影响最大，其次为牛乳的摄入。结果见表3。
表2产妇乳汁SA含量与饮食习惯[例(%)]
注：以上变量赋值情况按照表中分类顺序依次为0，1，2；*P<0.05表示差异有统计学意义。
表3影响乳汁SA的饮食习惯的Logistic回归分析
讨论
本研究显示每周食用红肉的频率对血清SA的影响最大，其次为牛乳的摄入。红肉、乳类的摄入可增加产妇乳汁SA的含量。
有关SA消化和吸收机制鲜为人知，目前的最新研究只停留在哺乳动物身上，尤其是饮食摄入方式对母体唾液酸的影响研究还很少。
红肉、牛乳及蛋类中含有丰富的唾液酸[1,11]，多种食物中，如牛肉、猪肉、羊肉、鸡肉等肉类，含有很丰富的Neu-5GC[6]。本研究的红肉及乳类属于同一地区的货源，产妇每次摄入的食品质量基本一样，故以每周摄入食物的次数统计。结果显示，红肉及乳类摄入频率高的产妇，其SA含量明显高于红肉及乳类摄入频率低的产妇。这与红肉及乳类中含有高于其它食品的SA有关。即SA含量高的食物为红肉(羊肉、猪肉和牛肉等)、鸡蛋和乳制品(牛乳和奶酪)[11-12]，鸡蛋黄的SA含量也相当高[13]，其中对澳洲和美国肉类食物中具体的SA含量进行的测定已经证实[12]，每克组织含有SA的量分别为牛肉118 μg/g、猪肉60 μg/g、羊肉68 μg/g、小鸡肉53 μg/g、鸡蛋176 μg/g，牛乳258 μg/g ，可见牛乳、鸡蛋和牛肉含有SA的量相对来说比较高[14]。当外源性摄入较多红肉、牛乳及蛋类时，SA通过胞饮、细胞内吞作用和溶酶体转运吸收进入人体进行代谢，从而增加了机体SA的含量，乳汁也不例外。
本研究在单因素分析中，高乳汁SA组的产妇摄入的鸡蛋频率显著大于低乳汁SA组的产妇，资料记载鸡蛋SA测定含量也较高，但是在多因素logistic回归结果中未发现鸡蛋进食量与SA营养状况有显著的相关性。说明进食红肉与牛奶对乳汁唾液酸的影响要大于进食鸡蛋后对其的影响，这一现象与地区生活习惯或者食物成分的差异是否有关还有待考证。总之，本研究揭示了食物种类和摄入量对母乳汁SA的影响，红肉乳类摄入有助于产妇乳汁SA含量的增加，不足之处在于未对产妇食用的食品如牛乳、鸡蛋、肉类等进行SA的定量测定，这还有待于做进一步的研究。
参考文献
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